实验九 环境因素对微生物生长的影响

发布时间:2021-07-30 15:06:03

微生物实验九——
环境因素对微生物的影响
一,实验目的 了解常用化学消毒剂,紫外线及温度对微生物的作用 观察各因素对微生物生长抑制的强弱 二,实验原理 1.化学因素 环境当中很多化学因素都可以影响微生物的生长. ①酸类(PH 值) H+影响菌体细胞质膜上电荷性质,微生物吸收物质变化,影响代谢,高浓 度 H+或引起菌体表而蛋白质和核酸水解以及影响酶和活性; ②碱类:引起蛋白质,核酸水解,破坏酶的活性; ③重金属盐类:引起蛋白质失活;或与代谢产物鳌合作用使其变为无效化合 物; ④氧化剂:氧化蛋白质活性基团; ⑤有机化合物:对微生物有杀菌作用的有机化合物种类很多,其中酚,醇, 醛等能使蛋白质变性,是常用的杀菌剂. 2.物理因素 紫外线:作用于生物体 DNA,紫外线照射后受损的细胞,如果立即暴露在可见 光下,则有一部分仍可恢复正常活力; 温度:通过影响蛋白质,核酸等生物大分子的结构与功能以及细胞结构入细 胞膜的流动性及完整性来影响微生物的生长, 繁殖和新陈代谢. 微生物群体生长, 繁殖最快的温度为其最适生长温度. 三,实验材料 1,菌种 大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,酵母菌 2,培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基,马铃薯琼脂培养基 3,溶液及试剂 2.5%碘酒,5%石炭酸,75%乙醇,5%甲醛,无菌生理盐水 4,器材 无菌培养皿,无菌滤纸片,无菌镊子,黑布,试管,吸管,三角涂 棒 2 人/组: 6 只无菌*皿,4 只 1ml 无菌吸管,2 只三角玻棒,滤纸圆片 10 片; 1 个大台面公用: 菌种:金黄色葡萄球菌菌液,大肠杆菌菌液,酵母菌菌液; 培养基:牛肉膏蛋白胨琼脂培养基,马铃薯琼脂斜面培养基; 器材:2.5%碘酒,5%石炭酸,75%乙醇,5%甲醛,无菌生理盐水,镊子, 黑布; 四,实验步骤 (1)化学因素 1,将已经灭菌并冷却到 50 ℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基倒入无菌培养 皿中,水*放置待凝固,做标记; 2,用无菌吸管分别吸取 0.2 ml 培养 18 h 的金黄色葡萄球菌菌液(1 皿)和 大肠杆菌菌液(1 皿)加入上述*板中,用无菌三角涂棒涂布均匀(2 人/组,一

人做一种菌液) ; 3,将已经涂布好的*板底皿划分为 4 等份,每一等份内标明一种消毒剂(2.5% 碘酒,5%石炭酸,75%乙醇,5%甲醛)的名称; 4,用无菌镊子将已灭菌的小圆滤纸片分别浸入装有各种消毒剂中浸湿,在皿 中间放入浸过无菌生理盐水的小圆滤纸片对照; 5, 将上述贴好滤纸片的含菌*皿倒置放于 37℃条件下培养 24 h 后观察并用直 尺测量抑菌圈的大小. (见图 1) (二)紫外线杀菌实验 1,将已经灭菌并冷却到 50 ℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基倒入无菌培养皿 中,倒 2 只*皿,水*放置待凝固,做标记; 2,用无菌吸管分别吸取 0.2 ml 培养大肠杆菌菌液加入上述 2 只*皿中, 用无菌三角涂棒涂布均匀涂布大肠杆菌菌液; 3,将其中一只*皿盖子打开,至于超净工作台紫外灯下照射 10 min,合上 盖子,另一只*皿对照(不照射) ,用黑布包裹在一起,倒置 37 ℃培养,24 h 后观察并记录实验结果. (三)温度实验 1,将已经灭菌并冷却到 50 ℃左右的马铃薯琼脂斜面培养基倒入无菌培养 皿中,倒 2 只*皿,水*放置待凝固,做标记; 2,用无菌吸管分别吸取 0.2 ml 培养酵母菌菌液加入上述 2 只*皿中,用 无菌三角涂棒涂布均匀涂布酵母菌菌液,做标记; 3,分别放在 28℃和 50℃条件下倒置培养,24h 后观察并记录实验结果. 五,实验任务(2 人/组) : 1.化学因素实验:2 只分别接有金黄色葡萄球菌菌液和大肠杆菌菌液*皿,每皿 放入 4 片浸入过不同的消毒剂的滤纸圆片(放在皿的四周)和 1 片浸入无菌生理 盐水的滤纸圆片(放在皿的中央) ,24h 观察测量; 2.紫外线杀菌实验: 2 只接有大肠杆菌菌液的*皿,一只经过紫外处理,另一只 对照,后用黑布一起包裹,24 h 观察记录; 3.温度实验: 2 只接有酵母菌菌液的*皿,24h 观察记录. 课后及时观察并记录实验结果,分析结果. 六,思考题 1,结果 (1)酵母菌的适宜生长温度是多少? (2)列表比较四种化学消毒剂对两种细菌的杀(抑)菌作用. ("-"表示不生长, "+"表示生长较差,"++"生长一般,"+++"表示生长良好) 2,思考题 (1)影响抑(杀)菌圈大小的因素有哪些?抑(杀)菌圈大小是否准确地反 映出化学消毒剂地抑菌作用还是杀菌作用? (2)在紫外线实验中为什么要用黑布包裹培养?


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